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药物分析教研室

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实验:可乐中山梨酸与糖精钠的HPLC测定

发布时间:2016-10-24   浏览次数:0

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一、实验目的

1.了解山梨酸、糖精钠作为食品添加剂的利弊及危害。

2.掌握HPLC在食品添加剂定量分析中的一般方法和操作过程。

二、实验原理

山梨酸是一种化学防腐剂,可以防止食品腐败变质,延长食品保存期,抑制食品中微生物的繁殖;糖精钠是一种人工合成甜味剂,其甜度为蔗糖的500倍,且价格低廉,常作为视频中的矫味剂。

糖精自1879年应用以来一直广泛使用并认为安全性高。但本世纪70年代初发现其对鼠有致癌性问题后,美国即从其GRAS名单中删除,并宣布禁用而后又延期禁用。1977年JECFA将其以前制订的无条件ADI(每日允许摄入量acceptable daily intake)0-5mg/kg体重改为暂定ADI 0-2.5mg/kg体重,并取消有条件ADI 0-15mg/kg体重。1984年JECFA再评价时,认为本品无诱变作用,仍需继续对其毒理问题进行研究并维持其暂定ADI。直到1993年再次对其进行评价时,认为以人类无生理危险,并制定ADI为0-5mg/kg体重。

山梨酸的ADI 为0-25mg/kg体重,是一种相对安全的食品防腐剂;在我国可用于酱油、醋、面酱类、果酱类、酱菜类、罐头类和一些酒类等食品。

添加剂在食品加工过程中被广泛使用,正确地使用食品添加剂对提高食品质量、防止食品变质有一定的积极作用, 但是食品添加剂不是食品原有成分,如果使用过量,就有可能对人体造成危害。GB2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》对其在饮料中最高使用量作了规定(如表1所示)因此要加强食品添加剂的管理, 获得准确、可靠的实验分析数据显得尤为重要。

表1

食品添加剂                           食品名称/分类                      最大使用量(mg/kg)         备 注

山梨酸及其钾盐             饮料类(包装饮用水类除外)                       500                   以山梨酸计

糖精钠                        饮料类(包装饮用水类除外)                       150                    以糖精计

 

可乐是黑褐色、甜味、含咖啡因的碳酸饮料。由于碳酸化学性质不稳定,易在室温下发生分解并释放CO2。为防止实验过程样品中大量碳酸盐的存在而影响实验结果,样品首先超声除去二氧化碳,并用稀氨水调节pH至中性,稀释并过滤后,进样至高效液相色谱仪中,经反相液相色谱分离后,根据保留时间与峰面积进行定性与定量。

三、仪器与试剂

1.仪器:高效液相色谱仪、色谱工作站、超声波清洗器等。

试药:甲醇(色谱纯)、乙酸铵(0.02mol/L)、氨水(2%)等为分析纯。

对照品:糖精钠标准品、山梨酸标准品。

可乐样品(密度:ρ0=1.0394kg/L)。

色谱条件:C18(250mm×4.6mm,5.0μm)色谱柱;

柱温为室温;

测定波长230nm;

流速:1.0mL/min;

流动相:甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液(9:91);

进样量:20μL。

四、实验步骤

(一)样品溶液的配制

将可乐倒入三角瓶中超声除气15min,用稀氨水调节试液pH

至7左右。移液管精密量取试液5mL至容量瓶中,定容至25mL,用0.45μm水系滤膜过滤,即得样品溶液。

(二)对照品溶液的配制

精密称定糖精钠对照品与山梨酸对照品各10mg分别至10mL量瓶中,加水溶解、稀释至刻度,摇匀,得糖精钠1.00mg/mL、山梨酸1.00mg/mL的储备液。精密量取储备液各1mL至10mL容量瓶,加水稀释至刻度,得糖精钠山梨酸100μg/mL混合工作液。

   精密量取1μL糖精钠及山梨酸混合工作液至10mL容量瓶,稀释至刻度,用0.45μm水系滤膜过滤,得混合对照品溶液。

(三)分析过程

分别取混合对照品溶液与样品溶液20μL注入色谱仪,记录样品中的目的峰面积,根据外标法计算样品中山梨酸与糖精钠的含量。

Cx=(Ax/AR)×CR

式中  Cx为供试品溶液添加剂X的浓度

     Ax为供试品溶液中添加剂X的峰面积

     CR为对照品溶液中添加剂X的浓度

     AR为对照品溶液中添加剂X的峰面积

Cx0=Cx×5/ρ0

式中  Cx0为可乐中食品添加剂X的浓度(mg/kg)

     ρ0为可乐的密度

     将Cx0与表1饮料中最高使用量进行对比,得出结论。

五、注意事项

1.本实验的进样量为20μL,但定量主要依靠六通进样阀的定量管,因此为保证充满定量管,进样量不应太少,本次实验应取不少于25μL。

六、思考题

 1.利用反相液相色谱法进行定量实验的优势?

 2.食品样品测定时,用乙酸铵作为流动相的原因?


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